实验技术：间充质干细胞长满后传代一定会加速老化吗？

在间充质干细胞（MSC）的培养领域，“细胞长满后传代易老化” 几乎成了实验人员的共识。按照基础培养基加血清、双抗，有人还添加 bFGF 的传统培养方法，许多研究人员都观察到：一旦细胞长满后才传代，老化迹象便会加速显现。然而，这一经验性认知真的放之四海而皆准吗？

事实上，以发展的视角审视，“长满后传代必然老化” 的结论并不成立。笔者早期沿用文献中的传统培养方式时，确实面临细胞老化难题，即便提前传代，也仅能将老化时间稍微延迟（比如从传代五次推迟到八次），延缓效果有限。其中原因都是各种猜测，也确实难以明确到底哪个才是真实的。

直到偶尔的机会使用了一款进口培养基，认知发生了转变。在避免操作损伤的前提下，即便细胞长满，老化速度也显著放缓。基于此，我们进行了大量的讨论和深入研究，认为间充质干细胞尽管都被称为MSC，但不同实验室养出来的MSC可能因为培养基的不同而差异巨大。所以，经过大量反复实验成功研发出能有效延缓老化的间充质干细胞培养基（FY200012），该培养基最长传代次数超过30次。使用该培养基时，最佳传代时机反而是细胞长满后。只要操作规范，减少机械损伤（如避免胰酶过度消化、防止移液枪反复强力吹打导致的细胞破损），细胞不仅不易老化，增殖效率还能大幅提升，这与 “提前传代延缓老化” 的传统认知形成鲜明反差。

此外，接种密度也是关键因素。不同类型和来源的 MSC，即使长满相同规格的 T25 培养瓶，细胞总数也可能相差一个数量级。因此，建议采用 1:4 - 1:6 的传代比例进行实验。如果一定要有个接种密度的数值，那么就根据具体细胞的传代比确定适用于这个细胞的接种密度。更换新的细胞后，之前的接种密度就不适用了，需要重新确定。但传代比一般变化不大，在研究中更为方便操作。

科学研究需要以动态思维突破固有认知。曾经的经验在新技术、新条件下可能不再适用。对于间充质干细胞培养而言，优质的培养基搭配规范的操作，完全能够打破 “长满即老化” 的桎梏，为细胞培养开辟新路径。