间充质干细胞老化和贴壁问题

——关于干细胞贴壁、干性、老化关系的一些小思考和培养小建议

经常会碰到什么干细胞老化的问题。想了很久，但又感觉怎么讲关于干细胞老化的问题都不太严谨，不太符合“科学”的原则。老化，这个在养干细胞的道友中几乎都知道的问题，我也时常讲起，听的人也大致知道是个啥。但，关于老化我确感觉找不到明确的可量化的标准，甚至连“老化”这个词本身就不那么科学。老化，似乎是干细胞培养中的一种普遍存在，却又好像不是科学意义上的“衰老”。好吧，不科学、不明确、不好定义，这些先不去管它，但总要有一点儿东西来描述它吧。

那就试着描述一下。以间充质干细胞为例，因为这个东西可能是我们讨论老化最多的，一个不小心，我们的间充质就沦落进了老化的深渊。说正事，所谓正常的或者健康年轻的间充质，体积较小、细胞轮廓光滑、核质比较大、细胞核紧凑明显、核仁清晰两三个、梭形纤维状或三角形、触角有但又不那么老长老长，形态上大概如此。性能上，整体倍增时间大概20-30小时（把传代后的短暂停滞计算在内）、具有成骨、成脂、成软骨分化能力。表面标志上，流式检测阳性指标都在95以上。

老化的间充质干细胞呢，形态上体积逐渐增大甚至到原来的三五倍甚至上十倍、形态坍缩成一大片烂树叶子样、细胞轮廓锯齿状的不清晰、细胞核也是硕大而不清晰、细胞整体折光性变弱、细胞内甚至一片混沌。性能上，细胞整体倍增时间大大延长、传代可能要五天甚至更久、有些培养表面怎么也看似没有细胞长上去、但分化能力还在（当然，如果没有了分化能力那就已经不是干细胞了）。表面标志上，阳性指标没有问题，但可能出现明显的离散系数增大。感觉上，老化主要是干细胞的自我更新能力变差，其实分化能力还在，如果分化能力丧失，那就不在我们讨论老化的范围内啦。

这些都是常见的问题，我们基本都能看到，就是描述的时候可能每个人不同而已。有个重要的问题可能往往被忽略，那就是间充质干细胞贴壁。其实，干性越好、增殖越快的干细胞它的贴壁能力就越差，反之越是老化的细胞它贴壁就越牢固。贴壁性能差常表现在两个明显的方面，一是细胞长着长着就聚团啦，刚接种上贴壁分散都还好，长个一两天细胞就神奇地聚成了很多小球。二是细胞消化特别容易，室温（20度左右）一分钟最多不超过两分钟就都掉下来啦。老化的细胞这两个方面是相反的。

不只是间充质干细胞，多能干细胞（ES、iPS）似乎也是符合上边讲的。只是多能干细胞我们用状态好和状态不好的表述方式。状态好的，甚至全能性的（naive）核质比巨大、细胞很小、折光性很好、立体感很强、细胞边缘很光滑、贴壁甚至是很半贴壁状态、甚至要种在饲养层上。状态不好的细胞呢，我们不讲分化，单说“老化”，那就是细胞变肥大、折光性变弱、立体感下降甚至趴在培养板表面（如E8培养），整体轮廓不圆润，当然，贴壁也变的比较好啦。
于是，感觉好像发现了一些问题，越好的干细胞贴壁越差、越差的干细胞贴壁越好，越好的干细胞越小、越差的干细胞越大。我们不讲科学，只是养细胞多了以后的感觉、直觉。杨振宁老师讲，直觉是建立在科学认知上的潜意识发现，希望我们的直觉也是。但愿有一天我们的直觉能变成科学的结论。

嘚吧嘚这么多，说点养间充质干细胞的时候实在的东西。怎么操作？
 

• 接受我们养的细胞贴壁不那么好，甚至偶尔长成小球我们应该偷着乐，表示我们的细胞状态还不错。
• 如果贴壁很好，甚至不幸出现了我们上边讲的各种让人难过的现象，那一定是培养系统出了问题，更换培养基吧，再生医学培养基成品的我们都拿来试一试。好吧，如果觉得太麻烦太费钱，不妨试试BI和弗元生物的。
• 如果细胞保持了年轻，却出现了一直长成小球，也挺恼火，咋办？我们和很多朋友已经踩过坑啦，那就是培养表面的问题。不要讲用的是进口的好板子，没用的，朋友们试过了，那几大进口品牌的培养板都无助于贴壁，换掉吧，去试试国产的，也许你能找到。我们找到了几个好点的，比方说青岛金典、上海卧宏。
• 实在还是解决不了贴壁问题，试着拿各种东西包被一下吧。也要注意包被的东西不能有副作用的，筛选包被的东西确实也是个耗时耗力的事情，但没办法，学费总还是要交的。

说了一大堆，解决问题就两个方面，培养基和培养表面。其他的我们就不要在怀疑自己怀疑人生啦。解决了这两个问题，其实我们都是高手，因为其他的问题我们从各种小红书小宝书上都学到见到过。祝我们早日成为高手！