1. 该部分以单细胞悬液为操作起始。使用胰酶、胶原酶、分散酶等酶消化法（推荐使用组织细胞消化液RC200104）从人脐带华通氏胶组织获得。
2. 原代接种：以上获得的细胞沉淀，漩涡震荡使其分散为单个细胞，加入适量的完全培养基，充分混匀。200 g离心5-10分钟。弃去上清，漩涡震荡使沉淀分散为单个细胞，加入适量的完全培养基，充分混匀。按照一定的细胞密度接种与培养器皿中。37℃、5%CO₂、饱和湿度静置培养48小时。该时间段内请勿移动培养器皿，也无需观察。48小时后观察细胞，根据情况选择半量或全量更换新鲜完全培养基。

注意：细胞培养务必选择合适的贴壁细胞培养器皿，若培养器皿不合适则严重影响细胞的贴壁、增殖甚至存活。

1. 换液培养：后每48小时更换新鲜培养基。观察细胞，弃去原培养上清。若悬浮细胞较多，则可用DPBS轻轻洗涤细胞1-2次。添加新鲜完全培养基继续培养。
2. 传代：原代细胞传代以克隆大小和克隆中心细胞密度为标准。若克隆中心细胞密度较大，则不论整个培养器皿是否长满均应进行传代操作。弃去培养上清，加入适量的DPBS，轻轻晃动后弃去DPBS，重复洗涤2-3次。加入适量的0.25%胰蛋白酶消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）室温消化2分钟，加入5倍体积的完全培养基终止消化。用移液管、吸管或移液枪头等轻轻吹打细胞，使细胞从培养皿表面脱落。

注意：足量的胰酶消化，室温消化不宜超过2分钟，吹打细胞时也不宜力量过大，轻轻吹打即可，不脱落细胞直接丢弃。

1. 冻存：参照下述“hUMSC细胞冻存”。

1. 原代细胞培养（组织块法）：

1. 该部分以组织块作为起始。组织块为脐带华通氏胶切成1-3 mm³大小的组织块。
2. 原代接种：用缓冲液清洗过的组织块，用适量的完全培养基悬浮，300目无菌滤网过滤或200 g离心5-10分钟，收集组织块。用适量的完全培养基重新悬浮组织块，均匀接种于培养器皿中，37℃、5%CO₂、饱和湿度静置培养。48小时内最好不要对培养器皿进行任何移动。
3. 换液：48小时后进行半量或全量更换新鲜完全培养基，具体视情况而定。每2天更换新鲜培养液。组织块周围有密度较高的细胞时，可以选择去除组织块。
4. 传代：参照上述“传代”方法。
5. 冻存：参照下述“hUMSC细胞冻存”。

1. hUMSC细胞传代培养（非原代）：

1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2. 弃去培养上清，加入DPBS溶液清洗1次，加入细胞消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）使其完全覆盖培养器皿底部。
3. 室温孵育1-2分钟，轻轻拍打培养器皿，显微镜下观察大部分细胞从培养器皿底部脱落后立即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞完全培养基，用移液器轻轻吹打培养器皿表面未完全脱离的细胞，使细胞完全脱落并均匀分散。
5. 将细胞悬液转移到离心管中，200 g离心5分钟。
6. 弃上清，加入完全培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：6比例传代，均匀铺在培养器皿中，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度培养箱中培养。

1. hUMSC细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存的hUMSC细胞，迅速将冻存管/冻存袋放入复苏装置或37℃水浴快速融化。
2. 将解冻后的细胞悬液缓慢加入适量完全培养基（冻存体积与培养基的体积比为1：5-1：10）。
3. 200 g离心5分钟，弃去上清，加入适量的完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞均匀铺到培养器皿中，摇动培养器皿使细胞均匀分布，37℃、5%CO₂、饱和湿度培养，24小时后观察细胞状态。
5. 24小时后更换新鲜完全培养基继续培养，以后每2天更换新鲜完全培养基。

注意：细胞传代所需的时间：2-4天。hUMSC消化极易过度，建议稀释0.25%胰酶消化液一倍，且严格控制消化时间，消化时长从细胞接触胰酶开始不宜超过2分钟。

1. hUMSC细胞冻存

1. 细胞达到90%汇合度，弃去原有培养基，DPBS清洗1次。
2. 加入细胞消化液（推荐使用间充质干细胞消化液，RC200108）使其完全覆盖培养器皿底部，室温孵育1-2分钟，轻轻拍动培养器皿，显微镜下观察大部分细胞从培养器皿底部脱落后立即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞完全培养基，用移液器轻轻吹打培养器皿地面未完全脱离的细胞，使细胞完全脱落并均匀分散。
4. 将细胞悬液转移到离心管中，200 g离心5分钟，弃去上清。
5. 加入适量细胞冻存液（推荐使用细胞冻存液Ⅱ，RC200106），调整细胞冻存密度在1×10⁶ cells/cm₂左右，每支冻存管分装0.5-1 ml，使用冻存袋冻存请自行根据需要选择冻存方案。
6. 程序降温仪冻存，或放入冻存盒然后置于-80℃或直接放入-80℃，24小时后转入液氮中长期保存。

注意：此处消化液为胰酶消化液。细胞冻存方法有多种，此处介绍的冻存方法为含有DMSO的冻存方式。其他冻存方式请根据需要自行选择。
 
细胞形态展示：
分化能力鉴定： 依次为成骨茜素红染色、成脂油红O染色、成软骨阿利新蓝染色结果。