1. 1、表面标志物检测：细胞的表面标志物检测可以参照 2006 年国际细胞治疗协会（ISCT）的标准。我们常规的操作是检测 10 个标志物，将常用的标志物均包括在内。包括阴性指标 CD11b、CD31、CD34、CD45、HLA-DR 和阳性指标 CD29、CD73、CD90、CD105、CD166。特别要注意 CD105 的阳性情况。
    

2. 2、细胞纯度判断：间充质干细胞是典型的间质类细胞，呈梭形，容易混入上皮类细胞导致纯度不足。判定方法可以用消化法。间充质干细胞在胰酶消化液中极容易脱壁，0.125% 的胰酶消化液 1 分钟即可使其脱壁，而上皮类细胞在这个时间内是不容易脱壁的。
    

3. 3、细胞分化情况判断：间充质干细胞培养过程中细胞分化常见的为纤维化。纤维化的细胞贴壁后呈较长的纤维状，且细胞排列多出现未完全融合时的纤维叠层生长，细胞漩涡状的整体形态不明显，偶尔可见悬浮的纤维结构。分化细胞见下图。
    

1. 4、细胞老化判断：细胞老化的典型特征是增殖速度变慢，倍增时间在 48 小时以上。显微镜下观察，除了具有普通细胞老化细胞膨胀变大、细胞内颗粒物增多、细胞内泡状结构增多等特征以外，细胞从梭形、细胞边界明显、遮光性强变为细胞扁平、边界模糊、触角增多、遮光性差。老化细胞见下图。
    

1、诱导培养基：诱导培养基请按照 FY200006 使用说明书使用。关于培养基中的结晶，该诱导培养基含有较多量的钙，出现结晶属于正常现象。完全培养基配制可以提前几个小时进行，可以使得各组分充分混匀和溶解。在培养基加入到细胞时确保时混合均匀的，即使在加入后能看到晶体样结晶也不影响诱导效果，MSC 若具有正常的成骨分化能力，在诱导十天左右即不能再观察到结晶的存在。
 

2、诱导过程中的细节变化：细胞诱导开始时并未完全汇合，加入诱导液培养后，一到两天的时间内细胞会快速增殖，并完全汇合。诱导 5-10 天开始会看到颗粒状沉淀，沉淀大小如细菌，容易与污染混淆。随着诱导继续，沉淀会越来越多，在诱导的 15-20 天内沉淀聚集凝结在一起形成「钙结节」。此时，「钙结节」有明显的遮光，根据遮光的情况决定是否终止诱导进行染色。特别注意，当有颗粒或絮状沉淀时，换液一定要轻柔，尽量避免换液时导致钙沉积流失，导致诱导效果不佳。
 

1、染色问题：染色严格按照说明书进行。在固定之前操作要轻柔，避免细胞成片脱落导致实验无法继续。固定后相对不易脱壁，但也尽量避免较大的液流冲击。染色要求染色液过饱和，如果沉淀过多，请适当多加染色液。染色后拍照颜色可能会有色差，可以用 PS 对颜色进行调整。
 

2、培养基本条件：细胞培养必须佩戴口罩、帽子、手套。头发、口鼻等是常见的细胞支原体污染源，培养室内头发等不能暴露在外。